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            油脂中磷脂測定法(GB5537—85)

            來源:本站  時間: 08-05

            油脂中磷脂測定法(GB5537—85)

            油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所組成的復雜化合物。

            (一)鉬藍比色法

            1.儀器和用具

            瓷坩堝或石英坩堝;分光光度計或帶塞的50ml比色管;移液管:5、10ml;電爐、高溫爐;溶量瓶:100、500、1000ml;表面皿、燒杯、量筒;恒溫水浴鍋;漏斗、坩堝鉗、試劑瓶等。

            2、試劑

            50%氫氧化鉀溶液;鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙;0.015%硫酸聯氨溶液;

            2.5%鉬酸鈉稀硫酸溶液:量取140ml硫酸注入300ml水中 ,搖勻,冷卻至室溫,加入12.5g鉬酸鈉,溶解后加入水至500ml,搖勻,靜置24h備用。

            磷標準溶液:稱取無水的磷酸二氫鉀0.4391g溶于1000ml水中,作為1號液,含磷0.1mg/ml,吸取1號液10ml,加水稀釋至100ml,含磷0.01mg/ml,作為2號液,比色用。

            3.操作方法

            (1)繪制標準曲線:取5只50ml比色管,編成1,2,4,6,8五個號碼,按號碼順序分別注入磷標準2號液1,2,4,6,8ml,再按順序分別加水 9、8、6、4、2ml。 接著向5只管內各加0.015%硫酸聯氨溶液8.0ml;各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0ml,加塞、搖勻。去塞,將5只管置于正在沸騰的水浴中加熱 10min,取出冷卻至室溫,用水稀釋至50ml,充分搖勻,經10min后,用分光光度計在波長650nm下,用3cm液槽,用水調整零點,分別測定消 化值。以消化值為縱坐標,以磷量(0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg)為橫坐標繪制標準曲線。

            (2)制備被測液:用坩堝稱取試樣約10g(準確至0.001g),加氧化鋅0.5g,先在電爐上加熱炭化,然后送入550~600℃的高溫爐中灼燒至灰 化(白色),灼燒時間約2h,取出坩堝冷卻至室溫,用熱鹽酸(1:1)10ml溶結灰分,并加熱微沸5min,將溶解液過濾注入100ml容量瓶中,用熱 水沖洗坩堝和濾紙,待濾液冷卻至室溫后,用50%氫氧化鉀溶液中和至出現混濁,緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后,再滴2滴,后用水稀釋至刻度,搖 勻。

            (3)比色:用移液管吸取被測液10ml注入50ml比色管中,加入0.015%硫酸聯氨8.0ml,加2.0ml鉬酸鈉稀硫酸溶液、加塞,將比色管置于 正在沸騰的水浴中加熱10min,取出冷卻至室溫,用水稀釋至50ml,充分搖勻,經10min后,用分光光度計在波長650nm下,用3cm液槽,用水 調整零點,測定消光值。

            4.結果計算

            根據被測液的消光值,從標準曲線查得磷量(P),按公式3—33計算磷脂含量:

            磷脂(%)=p×V2 / V1 ×26.31×100 / W×1000 (3—33)

            式中:P—標準曲線差得的磷量,mg; v2—樣品灰化后稀釋的體積,ml;

            V1—比色時所取的被測液體積,ml;26.31—每毫克磷相當于磷脂的毫克數;W—試樣重量,g。

            雙試驗結果允許差不超過0.04%,求其平均數,即為測定結果。測定結果取小數點后二位。

            (二) 重量法

            1.儀器和用具

            玻璃漏斗、漏斗架;燒杯:100ml; 錐形平、濾紙等。

            2.試劑

            丙酮

            3.操作方法

            取混勻的樣品約100ml,加熱約90℃時進行過濾。用燒杯稱取試樣25g,加熱至80℃,加水2~2.5ml,充分攪拌使之水化,在室溫下靜置過夜,或 進行離心沉淀,傾出上層清液,用已知恒重的濾紙(或用抽裝置抽濾)進行過濾,待濾液全部濾出后,用冷的丙酮把杯內殘留的沉淀沖洗入濾紙中,繼續用水調整零 點,測定消光值。

            4.結果計算

            重量法測定磷脂含量按公式3—34計算:

            磷脂(%)=W1 / W ×100 式中:W1—沉淀物重,g;W—試樣重量,g。

            雙試驗結果允許差不超過0.04%,求其平均數,即為測定結果。測定結果取小數點后二位。

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